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权 利 要 求 书
 
1.一种用于动物用灭活疫苗的乳化方法,其特征在于该方法包括如下步骤:
(1)新城疫病毒A-VII株:毒种用无菌PBS做适当稀释,尿囊腔接种9~11日龄低免鸡胚,每胚103.0~106.0EID50/0.1ml。选接种后48~96小时死亡的鸡胚,置2~8℃冷却12~24小时,收获鸡胚液于专业灭菌容器中,每0.1ml病毒液的病毒含量≥108.5EID50,备用;
传染性支气管炎病毒M41株:毒种用无菌PBS做适当稀释,尿囊腔接种9~11日龄低免鸡胚,每胚102.0~104.0EID50/0.1ml。选接种后24~48小时死亡的鸡胚,置2~8℃冷却12~24小时,收获鸡胚液于专业灭菌容器中,每0.1ml病毒液的病毒含量≥106.5EID50,备用;
禽流感H9亚型病毒WJ57株:毒种用无菌PBS做适当稀释,尿囊腔接种9~11日龄低免鸡胚,每胚103.0~106.0EID50/0.1ml。选接种后48~72小时后的鸡胚,置2~8℃冷却12~24小时,收获鸡胚液于专业灭菌容器中,每0.1ml病毒液的病毒含量≥108.5EID50,备用;
(2)将上述收获的新城疫病毒抗原、传染性支气管炎病毒抗原和禽流感H9亚型病毒抗原以一定的比例混合成水相,加入浓度为0.1%~0.25%的甲醛,于37℃,1000~2000r/min搅拌,灭活16~24小时;
(3)灭活完成后,加入甘氨酸和硫柳汞,混匀成水相;
(4)将白油,吐温-80和司本-80按一定比例混合成油相,无菌过滤;
(5)乳化容器放置于冰浴中,在容器中加入油相3份,2000r/min剪切搅拌,在剪切过程中缓慢加入1份水相,当水相加完后,搅拌剪切的速度调整至5000~9000r/min,搅拌5~10min;
(8)乳化完成后,测定粒径和黏度;
(9)在2~8℃保存24个月后,所制备的三联灭活疫苗未发现分层、效力检验合格。
2. 权利要求1所述一种用于动物用灭活疫苗的乳化方法,其特征在于该方法用于制备单一抗原成分的灭活疫苗和两种抗原成分的二联灭活疫苗。